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碱性蛋白酶的主要来源为微生物提取,研究和应用较多的主要是芽孢杆菌,以枯草杆菌为,也有少量其他菌种,比如链霉菌。
天然菌种的生产能力和所含的酶活性、稳定性往往达不到工业生产的需求,需要对菌种进行筛选改进,常用的方法有诱变、基因工程、蛋白质工程、孢子热处理等。主要目标是提高酶的活性、稳定性(耐温耐碱)、抗氧化、抗螯合性能。
1. 称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为 0.25 %,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调 PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中。搅拌混匀,置于 4℃ 内过夜。
2. 用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器( 0.22 微米微孔滤膜)抽滤除菌。然后分装成小瓶于 -20℃ 保存以备使用。
酸性蛋白酶是指蛋白酶具有较低的适pH,而不是指酸性基团存在于酶的活性部位,酸性蛋白酶的适PH从2左右(胃蛋白酶)到4左右。从酶的活力-PH曲线分析,在酶的活性部位中含有一个或更多的羧基。这一类蛋白酶中研究的是胃蛋白酶。
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